Materiali e Metodi

    Foglia, stelo, corteccia e lattice di Jatropha gossypifolia sono stati raccolti localmente nel loro habitat naturale e identificati dal Dipartimento di Botanica, Università degli Studi di Gorakhpur (UP) India. Foglie e corteccia del fusto di Jatropha gossypifolia sono state mantenute in un incubatore a 370C per l'essiccazione delle foglie e del fusto. Un pezzo secco di foglie e di fusto, sono stati polverizzati in un mortaio. Il lattice di Jatropha gossypifolia è stato prosciugato in tubi di vetro, tagliando loro apici staminali, questo lattice è liofilizzato a -400C e la polvere liofilizzata è stato immagazzinata per un ulteriore uso. La polvere liofilizzata è stata mescolato con un volume adeguato di acqua distillata per ottenere la concentrazione desiderata. Le dosi sub-letali (40% e 80% LC50/24h) ottenute utilizzando il lattice Jatropha gossypifolia di staminali, corteccia e foglie in concentrazioni sub-letali (40% e 80% LC50/24h) di combinazioni singole, binarie e terziarie con la rutina, acido ellagico, taraxerol e betulino per la riproduzione di precedenti studi [12].
    Rutina (C27H30O16) (CE NO-205-814-1), acido ellagico (C14O6O8) (4,4,5,5,6,6-acido Hexahydroxydiphenic, 2,6,2,6-dilactone) (NO-CE 207-508-3), betulino (C30H50O2) (Lup-20 (2a)-ene-3SS-28-diol) (CE NO-207-475-6) forniti da Sigma Chemical Co. PO Box 14.508 St. Louis. Mo.63178 USA 314-771-5750.
    Rutina, acido ellagico, betulino e taraxerol estratto dal gambo-corteccia di Codiaeum variegatum [13]. Differenti combinazini binarie (1,1) e terziarie (1:1:1) sono state preparate con polvere liofilizzata di lattice di Jatropha gossypifolia con rutina, acido ellagico, taraxerol e betulino con il lattice di Jatropha gossypifolia sono state preparate con il metodo di [14].

ESPERIMENTI DI FECONDITA'

La lumaca è stato trasferita da stagni in terreni cementati al laboratorio per la prova di fecondità. Tre set di acquari con terreno cementato pieni ciascuno di 5L di acqua di stagno sono stati preparati con gli estratti di lattice, corteccia, fusto e foglia di J. gossypifolia, rutina, acido ellagico, betulino e taraxerol di composti attivi. Il primo set contiene 40% di LC50 (24h), il secondo set contiene 80% del valore di CL50 (24 ore), mentre il terzo acquario contiene solo terra cementata e acqua di stagno (es. controllo). Cinquanta lumache sono state collocate in ogni acquario per le prove di fecondità. Ogni acquario contiene sei repliche. La temperatura dell'acqua è stata mantenuta a 23 ± 1.5°C durante tutti gli esperimenti.
    Adulti di lumache d'acqua dolce Lymnaea acuminata (2.6 ± 0.3 cm di di lunghezza della conchiglia) sono stati raccolti da stagni di acqua dolce e conservati per 48 ore negli acquari di vetro contenenti acqua di rubinetto declorata. Queste lumache depongono le loro uova in forma di capsule gelatinose allungate contenenti 5-180 uova. Gruppi di 50 lumache in 5L di acqua sono stati esposti a concentrazioni sub-letali (40% e 80% di LC50/24h) di combinazioni singole, binarie (1: 1) e terziarie (1:1:1) per la sopravvivenza e la schiusa delle lumache.
    Poichè è difficile rilevare le lumache madre per un uovo particolare, le capsule contenenti uova di ciascun gruppo trattato sono stati incubati a 300C in oggetto di pietra contenenti la stessa concentrazione, come indicato per le lumache adulte. Lo sviluppo degli embrioni è stato osservato al microscopio binoculare, a intervalli regolari fino alla loro schiusa. La percentuale di cova è stato studiato solo per le uova deposte dopo 24 ore dal periodo di esposizione. Le uova morte sono state rimosse per evitare qualsiasi contaminazione dell'acqua. La sopravvivenza delle lumache giovani è stata osservato fino a 72 ore dopo la schiusa.

Materials and Methods

    Leaf, stem bark and latex of Jatropha gossypifolia were collected locally from their natural habitat and identified by the Botany Department, University of Gorakhpur (U.P) India. Leaf and stem bark of Jatropha gossypifolia were kept in an incubator at 370C for dried the leaf and stem bark. Dried piece of leaf and stem bark, were pulverized in a grinder. The latex of the Jatropha gossypifolia was drained in glass tubes by cutting their stem apices, this latex was lyophilized at -400C and lyophilized powder was stored for further use. The freeze-dried powder was mixed with appropriate volume of distilled water to obtain the desired concentrations. The sub-lethal doses (40% and 80% LC50/24h) contains using Jatropha gossypifolia latex, stem bark and leaf and sub-lethal concentrations (40% and 80% LC50/24h) of singly, binary and tertiary combination with rutin, ellagic acid, taraxerol and betulin for the reproduction for previous studied [12].
    Rutin (C27H30O16) (EC NO-205-814-1), ellagic acid (C14O6O8) (4,4,5,5,6,6-Hexahydroxydiphenic acid, 2,6,2,6-dilactone) (EC NO-207-508-3), betulin (C30H50O2) (Lup-20(2a)-ene-3ß-28-diol) (EC NO-207-475-6) supplied by Sigma Chemical Co. P.O. Box 14508 St. Louis. Mo.63178 USA 314-771-5750.
    Rutin, ellagic acid, betulin and taraxerol extracted from the stem-bark of Codiaeum variegatum [13]. Different binary (1:1) and tertiary (1:1:1) combinations were prepared with lyophilized powder of Jatropha gossypifolia latex with rutin, ellagic acid, taraxerol and betulin with latex of Jatropha gossypifolia were prepared using the method of [14].

FECUNDITY EXPERIMENTS

    The snail was transferred from the earthen cemented ponds to laboratory conditions for fecundity test. Three sets of aquaria each filled with 5L earthen cemented pond water were set for extracts of latex, stem bark and leaf of J. gossypifolia, rutin, ellagic acid, betulin and taraxerol of active compounds. First set contains 40% of LC50 (24h), second set contains 80% of LC50 (24h), while third set of aquarium contains earthen cemented pond water only (i.e. control). Fifty snails were placed in each aquarium for the fecundity tests. Each set of aquarium contains six replicates. Water temperature was kept at 23±1.5°C during the whole experiments.
    The freshwater adult snails Lymnaea acuminata (2.6±0.3 cm in shell length) were collected from freshwater ponds and stored for 48h in glass aquaria containing dechlorinated tap water. These snails lay their eggs in the form of elongated gelatinous capsules containing 5-180 eggs. Groups of 50 snails in 5L water were exposed to sub-lethal concentrations (40% and 80% of LC50/24h) of combinations singly, binary (1: 1) and tertiary (1:1:1) for survival and hatchability of snails.
    Because it is difficult to detect the mother snails for a particular spawn, capsules containing eggs from each treated group were incubated at 300C in covered petridishes containing the same concentration as given to adult snails. The development of embryos was observed under a binocular microscope at regular intervals up to their hatching. Percent hatching was studied only with the eggs layed after 24h exposure period. Dead eggs were removed to avoid any water contamination. Survival of young snails was observed up to 72h after hatching.